E’ calata la notte nel castello di Inverness. Duncan e gli altri nobili thane si sono ritirati nelle loro stanze dopo un lauto banchetto per ristorarsi dopo la lunga giornata. Approfittando della tarda ora, Lady Macbeth ha drogato le guardie di stanza alla camera del re, permettendo al suo consorte di prendere il pugnale di uno di loro e avvicinarsi inosservato al giaciglio del re.