Varicella zoster virus (VZV) is a member of the alphaherpesvirus subfamily and with a genome encoding 70 proteins the smallest of all human herpesviruses. Upon primary infection it causes varicella also called chickenpox in children. As a consequence, it reaches sensory nerve ganglia where latency is established. Upon reactivation it causes a secondary disease called Herpes zoster mostly in adults. Todate, VZV is the least studied human herpesvirus due to the lack of cell-free virus in culture, of virus-specific tools and an effective animal model. Therefore, many aspects of the VZV infection cycle, of latency and reactivation are poorly characterized. Moreover, the function of many proteins specific to VZV has not been identified.

The goal of this research was to generate hybridoma clones as a permanent source of VZV specific antibodies and to use the antibodies produced to study the localisation of VZV proteins in the viral context on a proteome-wide level. To this end, a VZV ORFeome entry library was constructed using the Gateway® recombinational cloning technology. For VZV protein expression in E. coli, the entry library was subcloned into four different pET derived expression vectors providing either an N-terminal His6, a C-terminal His6, an N-terminal MBP, or an N-terminal GST tag. Following purification of 64 VZV proteins, mice were immunised and subsequently used to generate antibody producing hybridoma clones. So far, our clone collection contains 218 mother clones producing antibodies to 61 (87%) VZV proteins. In this clone collection 190 clones were identified as positive in Western blotting covering 57 VZV ORFs while 123 antibodies were tested positive in immunofluorescence covering 52 VZV ORFs.

Using this novel antibody collection, the localisation of 52 (74%) proteins could be determined in the context of VZV infection 22 of which were analysed for the first time. In total, 20 ORFs were localised in the nucleus, 16 ORFs were present in the cytoplasm and 16 ORFs were found in both the nucleus and cytoplasm. Comparison of 41 core proteins present in HSV-1, VZV, CMV, EBV as well as KSHV showed excellent agreement in localisation of conserved glycoproteins, capsid and tegument proteins. Several immunodominant regions on the viral glycoproteins gK, gB, gL, gI, gE and the membrane associated phosphoprotein ORF24 were identified using the pepscan technique. This precious antibody collection gives access to various experimental approaches and will allow to unveil biological secrets in the field of Herpesvirology.

Hintergrund: Patienten nach HSZT haben ein ansteigendes Risiko erneut an malignen Zweittumoren zu erkranken. Die Häufigkeit und Risikofaktoren für maligne Zeittumore bei Langzeitüberlebenden wurden in dieser retrospektiven

Multicenter-follow-up-Studie berechnet. In der bereits 1999 vorgenommenen Analyse dieser 1036 Patienten aus 45 Transplantationszentren der EBMT, welche mehr als 5 Jahre nach Transplantation überlebten, galten Patientenalter und

Immunsuppression als Hauptrisikofaktoren für die Entstehung von malignen Zweittumoren.

Patienten und Methoden: In der aktuellen Follow-up Studie konnten Daten von 636 Patienten erneut erhoben werden, 100 Patienten starben und von 300 Patienten konnten die Daten nicht aktualisiert werden. Erneut wurden Zweittumore erfragt, die kumulative Inzidenz ermittelt und einer Vergleichsgruppe nach Alter und Geschlecht gegenübergestellt.

Als Variablen wurden Patientenalter und –geschlecht, Diagnose und Krankheitszustand zum Zeitpunkt der Transplantation, Histokompatibilität des

Spenders, Konditionierungsschemata, Prophylaxe, Entwicklung und Therapie einer Graft versus Host-Erkrankung geprüft. Mit Hilfe des Log Rank Testes wurden in der

Univariaten Analyse potenzielle Risikofaktoren für maligne Zweittumore mit der Zeit bis zur Tumordiagnose ermittelt. Risikofaktoren mit p < 0,200 wurden in die

Multivariate Analyse (Cox Regression) einbezogen.

Ergebnisse: Die mediane Beobachtungszeit nach Transplantation lag bei 17,9 Jahren. Zweittumore wurden bei 114 Patienten erfasst, das errechnete Risiko für

einen malignen Zweittumor betrug nach 10 Jahren 4,0% nach 15 Jahren 8,5%, nach 20 Jahren 14% und nach 25 Jahren 21%.Die Inzidenz für maligne Tumore in dieser

Patientengruppe war ca. 6-mal höher als in einer nach Alter und Geschlecht geordneten Vergleichsgruppe (p < 0,001).Als Risikofaktoren nach HSZT ergaben sich in der multivariaten Analyse Patientenalter > 30 Jahre (HR 1,022; 95% KI

1,003-1,0042; p = 0,025) und immunsuppressive Behandlung (HR 3,223; KI 1,168-8,899; p = 0,024), speziell mit Thalidomid. Tumorfreies Überleben reduziert sich

bei Patienten älter als 30 Jahre bei Transplantation (HR 1,032; KI 1,019-1,046;48 p < 0,001), bei Patienten, die einen weiblichen Stammzellspender haben (HR 1,426;

KI 1,052-1,931; p = 0,022), immunsuppressiver Behandlung (HR 1,441; KI 1,060-1,957; p = 2,020) und Strahlentherapie (HR 1,986; KI 1,067-3,696; p = 0,030).

Schlussfolgerung: Eine längere Nachbeobachtung von Patienten nach HSZT zeigt einen übernormalen Anstieg der kumulativen Inzidenz für maligne Neubildungen.

Eine Nachbeobachtungszeit von mehr als 15 Jahren beweist, dass nicht nur älteres Patientenalter und Immunsuppression, sondern auch weibliches Spendergeschlecht

und Strahlentherapie Risikofaktoren für ein Überleben ohne Zweitmalignome sind.