Tierärztliche Fakultät - Digitale Hochschulschriften der LMU - Teil 02/07

The aim of the study was to further investigate the importance of local other and to detect possible differences of expression and localisation in poly- and monoovulatory species.

Therefore ovaries of sexually mature gilts were collected at the local abattoir and follicles, which were determined to be in the follicular phase of oestrous cycle, ovarian stromal tissue and corpus luteum (CL) were prepared. In two experiments mRNA expression of gonadotropin receptors (LHR, FSHRregulatory factors during the final follicle growth in pig, to clarify relations among each), Aromatase (P450 Aro) and growth factors (fibroblast growth factor (FGF-1, FGF-2, FGF-7) and their receptors (FGFR-1IIIc, FGFR-2IIIb, FGFR-2IIIc), vascular endothelial growth factor (VEGF) and receptors (VEGFR-1, VEGFR-2), angiopoietin-tie-system (Angp-1, Angp-2, Tie-1, Tie-2) and nitric-oxid-synthase (eNOS, iNOS) were measured by qRT-PCR. An immunohistochemically determination and localisation was carried out for FGF-2, VEGF and VEGFR-1. Molecular size of FGF-2 was determined by westernblot. mRNA expression of the selected factors in pig total follicles and expression intensity in comparison to stromal tissue and CL was checked in experiment 1. Experiment 2 was concerned with the exact regulation of growth factors in the follicle compartments granulosa cells (GC) and theca interna (TI) during final follicular growth. A classification of follicles was performed according to follicular fluid oestradiol-17β (E2)-, progesterone and prostaglandin F2α content into four groups (2-3mm, 4-6mm, >7mm, post LH).

Expression of FSHR decreased during follicle growth, while LHR and Aromatase increased. mRNA of FGF-family members was strongly expressed in stromal tissue. This was confirmed immunohistochemically by dominant localisation of FGF-2 protein in stromal cells. 18kDa and 22kDa isoforms of FGF-2 were overriding determined in stromal tissue. VEGF was located in GC and TI but not in stromal tissue. The receptor, VEGFR-1 was found in the endothelial- and smooth muscle cells of blood vessels. VEGF mRNA expression decreased after LH-peak. VEGFR-2 was upregulated in large follicles, VEGFR-1 after LH-peak. Angp-2/Angp-1 ratio was highest in small follicles, lowest in large follicles. After LH-peak the ratio rose again. Expression of eNOS was opposite with iNOS, which was downregulated in large follicles.

FSH plays an important part in recruiting a folliclepool at time of luteolysis, while the further developing follicles become LH dependent. The number of LHR is an important selection criteria for the follicles. LH and E2 cause GC proliferation by mediators like FGF-7 and enhance angiogenesis by stimulating VEGF. While the follicle growth-up fast the pressure of oxygen in the follicular antrum decreases, whereby angiogenetic factors like VEGF and angiopoietins get stimulated and provide an adequate blood supply for the follicles. Activated by LH and VEGF eNOS is producing NO, which controls E2 synthesis and leads to a better blood flow in the TI through vasodilatation. Increasing E2 concentrations in large follicles stimulate Angp-1, which stabilise the now sufficient bloodvessel network in the TI. After the LH-peak Angp-2 destabilises the blood vessels, which is important for the process of ovulation and the succeeding angiogenesis in CL buildup. For follicle selection an important parameter seems to be the localisation of VEGF and FGF in the follicle. VEGF acts in the follicle and therefore follicles which express more VEGF and receptors have a developmental advantage. In cows this fact is suggested as one basic in selection of the one dominant follicle. FGF-2 in the pig is mainly expressed in stromal tissue and able to activate FGFR in the TI and increases angogenesis in a synergistic way with VEGF and its receptors. FGF-2 in stromal tissue consequently has influence on a few follicles and is maybe an important component in selection of follicles during final follicular growth i

In der vorliegenden Arbeit wurden Daten von 938 Hunden und 292 Katzen mit Verdacht auf Sepsis erfasst, bei denen im Zeitraum von 1995 bis 2004 an der Medizinischen Kleintierklinik der Ludwig-Maximilians-Universität in München Blutkulturen durchgeführt wurden. Ziel des ersten Teils der Studie war es, die Bakterienverteilung bei Hunden und Katzen mit Sepsisverdacht zu bestimmen und deren Antibiotikawirksamkeit zu ermitteln. Im zweiten Teil der Studie wurden die Daten der Hunde und Katzen mit Anzeichen einer Sepsis ausgewertet, bei denen ein klinisch signifikantes Bakterium aus dem Blut isoliert wurde oder bei denen ein möglicher Kontaminant aus mindestens zwei bakteriologischen Blutkulturen kultiviert wurde. Die klinischen und labordiagnostischen Veränderungen, die betroffenen Organsysteme, der Primärherd der Infektion und die Letalitätsrate dieser Hunde und Katzen wurden bestimmt.

Von allen untersuchten Blutkulturen waren 24.4 % der Proben von Hunden und 22.6 % von Katzen positiv. Mischinfektionen mit verschiedenen Bakterien wurden bei 11.4 % der Hunde und 12.1 % der Katzen gefunden. Sowohl bei Hunden als auch bei Katzen überwogen grampositive mit 68.2 % bei Hunden und 50.7 % bei Katzen über gramnegative Bakterien. Die prozentual am häufigsten grampositiven Bakterien stellten Staphylococcus spp. und Streptococcus spp. dar, während die häufigsten gramnegativen Bakterien Escherichia coli waren. Enrofloxacin, Chloramphenicol, Cephalexin und Amoxicillin/Clavulansäure zeigten die höchste in-vitro-Gesamtwirksamkeit bei Hunden und Katzen. Unter den Antibiotikakombinationen zeigte die Kombination von Enrofloxacin mit Amoxicillin/Clavulansäure die beste Wirksamkeit.

Befunde von 140 Hunden und 39 Katzen mit Sepsis wurden ausgewertet. Gastrointestinale Symptome und Anorexie waren die häufigsten vorberichtlichen Beschwerden bei Hunden und Katzen. Die häufigsten Laborveränderungen bei Hunden waren Neutrophilie, Linksverschiebung, Monozytose und Erhöhung der Alkalischen Phosphatase; wohingegen bei Katzen Neutrophilie, Linksverschiebung, Lymphopenie und Hyperglykämie am häufigsten zu finden waren. Bei 81.7 % der Hunde und 59.5 % der Katzen wurden mindestens zwei der „systemic-inflammatory-response-syndrome“-Kriterien gefunden. Disseminierte intravasale Koagulopathie trat bei 16.7 % der Hunde und bei 14.3 % der Katzen auf. Statistisch signifikant mehr Hunde mit gramnegativer Bakteriämie als mit grampositiver wiesen eine Hypalbuminämie auf (p = 0.007). Es gab keine anderen signifikanten Unterschiede zwischen Tieren mit gramnegativer und grampositiver Bakteriämie. Bei 30.7 % der Hunde und 23.1 % der Katzen konnte ein Primärherd der Infektion gefunden werden. Sowohl bei Hunden als auch bei Katzen wurden als häufigste Primärherde Hautinfektionen und der Gastrointestinaltrakt gefunden. Die Letalitätsrate betrug bei Hunden 32.6 %, bei Katzen 54.1 %.

Histo-morphological analyses after xenogeneic Transplantation mikroencap-sulated Islets of Langerhans in the Model „Pig-in-Rat“

Summary

The aim of this study was the detailed histological and immunohistochemical analyzation of microencapsulated xenogeneic islet grafts in previously streptozotozin (STZ)-diabetic Wistar WU rats. Microencapsulated porcine islets of Langerhans (mpLI) were transplanted intraperitoneal and under the left renal capsule of these rats without any medical immune suppression. New insights were to be gained into the cell-mediated reactions of the recipi-ent to the microencapsulated foreign cells and into the fibrosis of the grafts and their ne-ovascularization with the goal of establishing an effective therapy for type I diabetes with this form of xenogeneic islet cell transplantation (xITX). Complex immunohistochemical assays were established to accomplish this goal. When no species-specific antibodies or antisera were available, the cross reaction of human-specific reagents was used. This work analyses in retrospect the data of 18 animals following the implantation of empty micro-capsules and 65 animals that underwent xenotransplantation. The following questions were examined:

1. How long will non-encapsulated and alginate-encapsulated porcine islets of Langerhans function in STZ-diabetic Wistar WU rats?

2. How is the biocompatibility of empty alginate microcapsules in vivo in different transplantation sites and with different exposure times?

3. How do alginate-microencapsulated porcine islets of Langerhans behave in differ-ent transplantation sites and with different exposure times?

Special attention was given to the vitality of the islet cells, the fibrosis and neovasculariza-tion of the microcapsules, and the inner cell infiltrates. The most important results were:

1. As expected, 20 of the 64 transplanted rats lost their non-encapsulated grafts by day +5. The 44 microencapsulated grafts evolved into two groups; those with short-term function (n=30; up to day +40) and those with long-term function (n=14; up to day +502). Criteria for the graft function were normoglycemia (daily testing of the blood glucose levels) and body weight.

2. Empty alginate microcapsules showed an excellent biocompatibility up to 200 days after implantation; they kept their original form and size; few inflammatory cells developed (no more than in a normal wound healing process); no neovasculariza-tion or fibrosis was evident on the empty capsules.

3. The microencapsulated islets of Langerhans were found, without exception, in both transplantation sites: “new islet organs” developed in the peritoneum, mainly in the spleen, liver, pancreas, small intestine, and omentum. Some of the capsule aggre-gates that evolved were embedded in the “guest organ”. Each microcapsule was surrounded with a dense net of capillaries (recipient vessels). Despite the normo-glycemia, only a few insulin-positive cells were present on the microcapsules. Every capsule maintained its original round, firm form and size. No broken, crushed or damaged microcapsules were observed. Partial islet cell regeneration was shown in 30% of the recipient-specific pancreata. This was more distinctive in the rats with long-term function than in those with short-term function of the graft. mpLI showed different degrees of fibrosis depending on the transplantation site and the function. The fibrosis was much stronger in the rats with short-term function of the graft; we attribute this to the lower vitality and purity of the graft. Fibroblasts encased the mpLI, but didn’t infiltrate the alginate. Fibrotic and non-fibrotic mpLI were repeatedly observed alongside each other even after long exposure in vivo. The reasons for this are unknown. The strong neovascularization of each and every mpLI was surprising; this was never observed in the empty microcapsules. The capillaries lay solely in the inner capsule on the periphery of the fibrotic ring. They did not infiltrate the

Um die Veränderung und Entwicklung der objektiven Rindfleischfarbe während der Lagerung zu untersuchen, wurden vakuumierte Fleischscheiben aus dem M. longissimus dorsi von 30 Rindern über 8 Wochen gelagert. In jeder Lagerwoche wurden die Farbwerte L*a*b* der bestehenden Fleischoberfläche und eines frischen Anschnittes mit dem Minolta Chroma-Meter CR-400 gemessen. Als weitere Qualitätsparameter wurden der mikrobiologische Status (Gesamtkeimzahl, Laktobazillen, Milchsäurebakterien), die sensorischen Eigenschaften und der pH-Wert bestimmt. Ziel der Untersuchungen war, Referenzwerte für die Entwicklung der Rindfleischfarbe L*a*b* während der Reifung und Lagerung zu erarbeiten. Weiterhin sollte in der vorliegenden Studie die Farbmessung an Praxis- und Routinebedingungen in der Fleischwirtschaft angepasst werden, um ihren Einsatz in der Praxis zu verstärken. Drittens dienten die Versuche dazu, Zusammenhänge und Einflussnahme zwischen der Fleischfarbe L*a*b* und anderen Qualitätsparametern von Rindfleisch aufzuzeigen. In Voruntersuchungen wurde die Fleischfarbe von 255 Roastbeefs (15 bis 20 h p. m.) unmittelbar nach der Zerlegung ermittelt. Bei einer verkürzten Farbaufhellung (10 min, + 12°C) unter Praxisbedingungen zeigte der M. longissimus dorsi folgende, durchschnittliche Farbwerte: L* 33,12; a* 18,45; b* 6,62. Die Farbmessung unmittelbar nach der Zerlegung, on-line, eignet sich für einen Vergleich der Fleischfarbe zwischen verschiedenen Teilstücken und Betrieben. In den Vorversuchen konnte zudem nachgewiesen werden, dass signifikante Unterschiede in der Farbe des Roastbeefs zwischen den einzelnen Schlachttierkörpern bestehen. Innerhalb des M. longissimus dorsi eines Tieres erwies sich die Farbverteilung in der vorliegenden Untersuchung jedoch als gleichmäßig. Eine Farbmessung kann damit an jeder Stelle des Roastbeefs vorgenommen werden und ist repräsentativ für den gesamten Muskel. Im Hauptversuch wurde die Fleischfarbe L*a*b* über einen achtwöchigen Untersuchungszeitraum sowohl an der bestehenden Fleischoberfläche als auch an einem frischen Anschnitt gemessen. Dabei zeigte sich, dass zwischen der Farbe von Oberfläche und Anschnitt des M. longissimus dorsi ein starker, statistisch gesicherter Zusammenhang besteht. Für die Farbmessung unter Laborbedingungen wird dennoch weiterhin die Messung an einem frischen Anschnitt nach einstündigem „blooming“ empfohlen. Mit vergleichbar hoher Sicherheit kann jedoch unter Praxisbedingungen im Betrieb die Fleischfarbe durch Messung an der bestehenden Fleischoberfläche bestimmt werden. Die Entwicklung der objektiven Rindfleischfarbe über einen Zeitraum von acht Wochen ist erstmals dokumentiert worden. Die gewonnenen Daten dienen als Richt- und Vergleichswerte für zukünftige Lagerversuche. Am Tag der Zerlegung (15 bis 20 h p. m.) zeigten sich für einen frischen Anschnitt folgende Farbwerte: L* 36,5, a* 21,6, b* 10,5. Die Farbwerte der bestehenden Fleischoberfläche lagen geringfügig höher: L* 37,2, a* 22,9, b* 11,1. In der dritten Lagerwoche, nach Abschluss der Rindfleischreifung, wurden für die Anschnittsfarbe folgende Werte gemessen: L* 39,5, a* 25,5, b* 13,3. Dieser Anstieg der Farbwerte während der Reifung ist auch für die Oberflächenfarbe (L* 40,3, a* 25,9, b* 13,5) festgestellt worden. Die Farbwerte L*a*b* zeigten ab der 4. bzw. 5. Lagerwoche einen nochmaligen Anstieg. In der fünften Lagerwoche lagen die Farbwerte von Anschnitt (L* 39,8, a* 25,7, b* 13,2) und Oberfläche (L* 40,4, a* 25,7, b* 13,2) sehr eng zusammen. Der Anstieg fällt mit dem Ende der Mindesthaltbarkeit (35 Tage) zusammen und deutet auf Veränderungen in der Güte der untersuchten Roastbeefs hin. In den eigenen Untersuchungen zeigte sich eine negative Korrelation der objektiven Fleischfarbe mit dem pH-Wert. Der pH-Wert beeinflusste die Ausprägung der Farbwerte L*a*b* massiv. Er wies ebenfalls einen starken Einfluss auf die sensorische Beurteilung der Fleischfarbe auf. Zur korrekten Beurteilung der gemessenen Farbwerte sowie der

Die sonografische Darstellung und Differenzierung einiger abdominaler Organe und der Trächtigkeit ist bei Echinops telfairi mit Hilfe hochfrequenter Schallköpfe mit einer Leistung von 12 bis 15 MHz möglich. Wegen der Wehrhaftigkeit der Tiere ist die Untersuchung nur mit einem Assistenten durchführbar. Ablenkungen durch genaue Beobachtung des Tieres empfehlen die Videoaufzeichnung der Untersuchung zur nachherigen Betrachtung und Auswertung.

Regelmäßig sonografisch darstellbare Organe sind Harnblase, Nieren, Gebärmutterkörper, Milz, Leber, Gallenblase, Magen und Darmschlingen ohne Unterscheidung zwischen Dünn- und Dickdarm. Ultraschallbilder der Gebärmutterhörner lassen sich in 67,19% und solche der Hoden in 45,83% der Fälle produzieren. Die individuellen Schwankungen sind vor allem abhängig vom Verfettungsgrad des untersuchten Tieres. Die besondere Beschaffenheit des Fettes kann zu Verwechslungen mit parenchymatösem Gewebe führen.

Die sonografischen Trächtigkeitsuntersuchungen zeigen deutlich die unterschiedlichen Entwicklungsstadien von Feten verschiedener Muttertiere. Die Erstdetektion der Trächtigkeit ist ab Tag 14 p.c. möglich, eine sichere Aussage über das Vorliegen einer Trächtigkeit aber erst ab Tag 28 p.c. Ein Rückschluss aus dem Gestationsalter auf den Entwicklungsstand der Feten oder umgekehrt kann im Gegensatz zu Hund, Katze und Heimtieren nicht gezogen werden.

In der durchgeführten Studie wurde an Schweinen der Einfluss von intravenös verabreichtem BNP auf die Hämodynamik beim Abgang von der Herz-Lungen-Maschine untersucht.

Operiert wurden 2 Gruppen von je 10 deutschen Landschweinen. Die Tiere der Dosisgruppe erhielten beim Abgang von der HLM BNP als Bolus intravenös verabreicht(0,3µg/kg) und anschließend als kontinuierliche Infusion. Die Kontrollgruppe erhielt kein BNP.Die Schweine der Dosisgruppe zeigten am Versuchsende signifikant höheres HZV und signifikant höheren CI. Sie benötigten signifikant weniger Katecholamine als die Tiere der Kontrollgruppe.

In der vorliegenden Arbeit wurden epidemiologische Untersuchungen durchgeführt,

um einen Überblick über die territoriale Populationsdynamik von Flöhen in der

Region Karlsruhe zu gewinnen.

Die in der Region Karlsruhe in den Monaten Juni 2003 bis Mai 2004 festgestellte

durchschnittliche Befallsrate mit Flöhen betrug bei den untersuchten Hunden 5,1%

und bei Katzen 16%. Die höchsten Werte waren in den wärmsten Monaten (Juni und

August) zu verzeichnen. Bei Hunden ergab sich eine maximale Befallsrate im Juni

mit 18,2% und bei Katzen im August mit 32,7%. Am wenigsten Flöhe waren im

Januar, dem kältesten Monat, zu verzeichnen, mit überhaupt keinem Flohnachweis

auf Hunden und einem 10% Befall bei Katzen. Dieses Ergebnis stimmte mit Angaben

der Tierbesitzer überein, die im Sommer den meisten und im Winter den geringsten

Flohbefall beobachteten.

Die am häufigsten in der Region gefundene Flohspezies war der Katzenfloh, C. felis.

Katzen waren zu 85% und Hunde zu 60% mit dieser Spezies infestiert. Darüber

hinaus wurden Exemplare des Hundeflohs (C. canis), Igelflohs (A. erinacei) und

Menschenflohs (P. irritans) nachgewiesen.

Weitere Auffälligkeiten waren, dass Katzen besonders hohe Infestationsraten

zeigten, wenn sie in Gemeinschaftshaltung gehalten wurden. Es machte einen

signifikanten Unterschied, ob sie mit Auslauf (24,4% Floh-befallen) oder ohne

Auslauf (13,5% Floh-befallen) lebten. Bei Hunden war kein Zusammenhang

zwischen Flohbefall und Haltungsform zu erkennen.

Bevorzugte Darreichungsform von Flohbekämpfungsmitteln waren mit großem

Abstand die Spot-on-Präparate (68% bei Hunde- und 61% bei Katzenbesitzern).

Jedoch wenden nur 34% der Hunde- und 21% der Katzenbesitzer prophylaktisch

Antiparasitika an und nur 19% der Hunde- und 11% der Katzenbesitzer halten eine

Umgebungsbehandlung bei Flohbefall für erforderlich. 99% der Befragten konnten in

den letzten Jahren keinen Anstieg des Flohbefalls bei ihrem Tier feststellen.

Demgegenüber steht die aktuelle Umfrage von Beck und Pfister (2006), nach der

Kleintierpraktiker mehrheitlich eine Zunahme der Flohinfestationen beobachten.

In den Haushalten Floh-befallener Tiere wurde auf den Ruheplätzen der Tiere vor

allem Flohkot und Floheier, in geringerer Menge auch Flohlarven gefunden. In der

Umgebung dieser Plätze wurden ebenfalls Flohkot und Floheier und nur vereinzelt

Flohlarven nachgewiesen.

Weitere, in anderen Regionen durchgeführte epidemiologische Studien über das

Vorkommen von Flöhen können helfen, eine deutschlandweite Verteilungskarte über

die Prävalenzen verschiedener Spezies zu erstellen.

102 klinisch auffällige und 35 symptomlose Bienenvölker aus 19 bayerischen Landkreisen sowie 70 Proben des Ektoparasiten Varroa destructor wurden mittels RT-PCR auf das Vorkommen von Black queen cell virus (BQCV), Deformed wing virus (DWV) und Kashmir bee virus (KBV) untersucht. In 90.5 % der Bienenproben wurde mindestens eines der Viren nachgewiesen, wobei klinisch auffällige Völker hoch signifikant häufiger betroffen waren als symptomlose Völker (96 % vs. 74.3 %; p<0.01). Während KBV nicht in den Bienen nachgewiesen werden konnte, fanden sich BQCV- und DWV-Infektionen in jeweils 66.4 % der Proben. 42.3 % der Völker zeigten Doppelinfektionen mit BQCV und DWV.

131 der Bienenvölker wurden zusätzlich lichtmikroskopisch auf eine Infektion mit Mikrosporidien untersucht. Dabei wurden bei 14.5 % der Proben Mikrosporidiensporen nachgewiesen. 2.3 % der Proben zeigten leichte, 4.6 % mittelgradige und 7.6 % hohe Befallsgrade. Mit Hilfe einer Nosema apis-spezifischen PCR und einer universellen Mikrosporidien-PCR wurde in neun Proben eine Infektion mit Nosema apis und in neun weiteren Proben eine Infektion mit Nosema ceranae nachgewiesen. Eine Infektion von Bienen mit Viren war nicht mit einer Mikrosporidieninfektion korreliert.

In den von den Bienen gewonnenen und getrennt davon untersuchten Varroa-Milben fand sich bei 94.3 % DWV, 20 % BQCV und 14.3 % KBV. 94.3 % aller Milbenproben wiesen mindestens ein Virus auf, 22.8 % zeigten eine Doppelinfektion und 5.7 % eine Infektion mit drei Bienenviren. Der hier gezeigte Nachweis von KBV in den Landkreisen Amberg, Landshut, Erding, Mühldorf am Inn, Rosenheim und Oberallgäu ist die erste Beschreibung für ein Vorkommen von KBV in Bayern.

Die Ergebnisse dieser Untersuchung stützen die These nach einer ursächlichen Beteiligung von arthropodenübertragenen Bienenviren an den periodisch auftretenden Massenverlusten von Bienenvölkern in Bayern.