Fakultät für Physik - Digitale Hochschulschriften der LMU - Teil 01/05

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  • Adressierung und Strukturierung von Biomolekülen auf der Nanometer-Skala
    Im Rahmen dieser Arbeit werden Nanostrukturen aus biologischen Molekülen untersucht,
    sowie neue Methoden zur Strukturierung biologischer Systeme im nanoskaligen Bereich
    entwickelt und vorgestellt. Neben selbstorganisierten und enzymatischen Prozessen, wie sie
    bei der Strukturbildung biologischer Systeme eine wesentliche Rolle spielen, wird insbesondere
    auch eine neuartige Methode der gerichteten enzymatischen Hydrolyse biologischer
    Membranen, die eine gezielte Strukturierung im Nanometerbereich ermöglicht, vorgestellt. Vor
    dem Hintergrund, daß die Natur mit Polynucleinsäuren extrem vielseitige, universell
    einsetzbare und chemisch sowie molekularbiologisch sehr gut handhabbare molekulare
    Bausteine für den selbstorganisierten Aufbau hochintegrierter Nanoarchitekturen zur
    Verfügung stellt, werden ferner die grundlegenden Mechanismen und Kräfte der molekularen
    Erkennung bei der DNA-Basenpaarung sowie die mechanische Stabilität der DNA-
    Doppelhelix untersucht.
    - Durch kraftmikroskopische Untersuchungen an einer binären Mischung aus Dipalmitoyl-
    Phosphatidylcholin (DPPC) und Diarachidoyl-Phosphatidylcholin (DAPC) konnte
    erstmals die laterale Struktur von binären Lipidmischungen in Lipiddoppelschichten direkt
    bestimmt werden. Es konnte gezeigt werden, daß diese biologisch wichtigen Lipide in
    Lipiddoppelschichten spontan Domänen mit einer chrakteristischen Größe von etwa 10 nm
    bilden. Ein Vergleich der Ergebnisse der kraftmikroskopischen Untersuchungen mit denen
    von Neutronendiffraktionsexperimenten zeigte eine hervorragende Übereinstimmung der mit
    diesen beiden komplementären Techniken bestimmten mittleren Domänenabstände.
    - Untersuchungen des enzymatischen Abbaus von Lipidmembranen durch das lipolytische
    Enzym Phospholipase A2 (PLA2) erlaubten erstmals Einblicke in die Aktivität dieser
    Enzyme auf der Einzelmolekülebene. Es konnte gezeigt werden, daß die Enzymaktivität
    stark von den physikalischen Eigenschaften der Membran abhängig ist und daß Membranen
    in der Gel-Phase ausschließlich von Membrandefekten her und entlang der Hauptachsen des
    Molekülkristalls hydrolysiert werden, während die Hydrolyse flüssigkristalliner
    Membranen im wesentlichen isotrop verläuft. Die am freien Enzym gewonnenen
    Erkenntnisse konnten dann in einem nächsten Schritt zur Entwicklung einer neuartigen
    gerichteten Hydrolyse von Lipidmembranen genutzt werden, bei der mit der Spitze eines
    Rasterkraftmikroskops gezielt Defekte in kristallin gepackten Membranen induziert
    werden, und die Membranen dann durch das Enzym an Stellen mit diesen künstlichen
    Packungsdefekten hydrolysiert wird. Auf diese Weise konnten künstliche Strukturen in
    festkörpergestützten Membranen mit minimalen Strukturdurchmessern von bis zu 10 nm
    erzeugt werden.
    - Mit Hilfe von kraftspektroskopischen Untersuchungen an einzelnen DNA-Molekülen
    konnte erstmals ein neuartiger kraftinduzierter Schmelzübergang, der je nach
    Kraftladungsrate, Umgebungsbedingungen und DNA-Sequenz und Topologie zwischen
    einigen Piconewton (pN) und etwa 300 pN stattfindet, nachgewiesen werden. Durch
    Variation von Kraftladungsrate, Ionenstärke, Umgebungstemperatur und DNA-Sequenz
    konnte gezeigt werden, daß die mechanische Energie die unter Gleichgewichtsbedingungen
    bis zum kraftinduzierten Schmelzen in der DNA-Doppelhelix deponiert werden kann,
    hervorragend mit der freien Basenpaarungsenthalpie ∆Gbp der entsprechenden DNA-
    Sequenz unter den jeweiligen Umgebungsbedingungen übereinstimmt. Es konnte gezeigt
    werden, daß sich mit Hilfe der Temperaturabhängigkeit der mechanischen Stabilität von
    DNA die thermodynamischen Größen ∆Hbp und ∆Sbp von DNA direkt aus
    Kraftexperimenten an einzelnen Molekülen bestimmen lassen. Schließlich konnten die
    Basenpaarungskräfte von DNA erstmals sequenzspezifisch bestimmt werden. Die zum
    reißverschlußartigen Aufbrechen e
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